ABSTRACT
Three Brazilian isolates of bovine viral diarrhea virus (BVDV), antigenically distinct from the standard North American isolates, were selected to immunize BALB/c mice in order to obtain hybridoma cells secreting anti-BVDV monoclonal antibodies (mAbs). Two hybridoma clones secreting mAbs, reacting specifically with BVDV-infected cells (mAbs 3.1C4 and 6.F11), were selected after five fusions and screening of 1001 hypoxanthine-aminopterin-thymidine-resistant clones. These mAbs reacted in an indirect fluorescent antibody (IFA) assay with all 39 South and North American BVDV field isolates and reference strains available in our laboratory, yet failed to recognize other pestiviruses, namely the hog cholera virus. The mAbs reacted at dilutions up to 1:25,600 (ascitic fluid) and 1:100 (hybridoma culture supernatant) in IFA and immunoperoxidase (IPX) staining of BVDV-infected cells but only mAb 3.1C4 neutralized virus infectivity. Furthermore, both mAbs failed to recognize BVDV proteins by IPX in formalin-fixed paraffin-embedded tissues and following SDS-PAGE and immunoblot analysis of virus-infected cells, suggesting they are probably directed to conformational-type epitopes. The protein specificity of these mAbs was then determined by IFA staining of CV-1 cells transiently expressing each of the BVDV proteins: mAb 3.1C4 reacted with the structural protein E2/gp53 and mAb 6.F11 reacted with the structural protein E1/gp25. Both mAbs were shown to be of the IgG2a isotype. To our knowledge, these are the first mAbs produced against South American BVDV isolates and will certainly be useful for research and diagnostic purposes
Subject(s)
Animals , Mice , Cattle , Antibodies, Monoclonal/biosynthesis , Antibodies, Monoclonal/immunology , Diarrhea Viruses, Bovine Viral/immunology , Hybridomas , Antigenic Variation , Diarrhea Viruses, Bovine Viral/genetics , Diarrhea Viruses, Bovine Viral/isolation & purification , Fluorescent Antibody Technique, Indirect , Genotype , Horses , Mice, Inbred BALB C , Recombinant ProteinsABSTRACT
Seqüenciamento e análise filogenética de 17 amostras do vírus da diarréia viral bovina (BVDV) isoladas no Brasil identificaram quatro amostras (23,5 por cento) do genótipo 1a (BVDV-1a), nove amostras (52,9 por cento) do genótipo 1b (BVDV tipo 1b) e quatro amostras (23,5 por cento) do genótipo 2 (BVDV tipo 2). As amostras brasileiras de BVDV tipo 2 apresentaram-se genotipicamente distintas dos BVDV tipo 2 até entäo identificados na América do Norte e Europa, sugerindo pertencerem a um novo subgenótipo. A caracterizaçäo antigênica dessas amostras por neutralizaçäo cruzada revelou reatividade sorológica muito reduzida com cepas vacinais do BVDV. O anti-soro produzido contra três cepas vacinais do BVDV apresentou atividade neutralizante muito reduzida contra várias amostras brasileiras de BVDV tipo 1 e 2. Diferenças de até 128 vezes nos títulos de anticorpos neutralizantes foram observadas entre cepas vacinais e amostras brasileiras do BVDV. Nos testes de soroneutralizaçäo (SN) contra o vírus dos tipos 1 e 2, de 1134 amostras testadas, 280 (24,7 por cento) possuiam anticorpos neutralizantes anti-BVDV e dessas, 215 (76,8 por cento) apresentaram atividade neutralizante contra ambos os vírus, 37 (13,2 por cento) reagiram apenas contra o BVDV tipo 2 e 28 amostras (10 por cento) foram positivas apenas contra o BVDV tipo 1. Esses resultados demonstram que testes de SN utilizando vírus de apenas um genótipo podem resultar em número significativo de falsos-negativos e indica a necessidade da formulaçäo de vacinas com amostras locais de BVDV e/ou contendo vírus dos dois genótipos